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SD37-5G：具有 gDNA 消除功能的 5G First Strand cDNA Synthesis Kit
具有 gDNA 消除功能的 5G 一鏈 cDNA 合成試劑盒為 RNA 樣品中的逆轉(zhuǎn)錄和基因組 DNA 消除提供了快速高效的程序。為了在 RT-PCR 和 RT-qPCR 中獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，僅擴(kuò)增和檢測(cè) cDNA 非常重要。通過設(shè)計(jì)跨越外顯子/外顯子邊界的引物或探針，可以避免基因組 DNA 的干擾。然而，在不可能的情況下（例如，cDNA 來自單外顯子基因，或者基因組 DNA 序列中存在經(jīng)過加工的假基因），起始 RNA 樣品必須不含基因組 DNA。具有 gDNA 消除功能的 5G 一鏈 cDNA 合成試劑盒將 RNA 樣品的基因組 DNA 消除和第一鏈 cDNA 合成結(jié)合在一個(gè)簡(jiǎn)單的工作流程中，以確保 RT-PCR 和 RT-qPCR 結(jié)果的準(zhǔn)確性。由于無需進(jìn)行單獨(dú)的 DNase 消化并重新純化 RNA 樣品，因此可以節(jié)省您的時(shí)間和成本。
具有g(shù)DNA消除功能的5G第一鏈cDNA合成試劑盒是具有g(shù)DNA消除功能的4G第一鏈cDNA合成試劑盒的升級(jí)版本。它包括新一代逆轉(zhuǎn)錄酶，5G逆轉(zhuǎn)錄酶，適合逆轉(zhuǎn)錄優(yōu)化。緩沖液進(jìn)一步提高了單鏈合成的效率。該試劑盒中的5×gDNA去除緩沖液可在42°C 2 min下快速去除基因組DNA污染，確保后續(xù)結(jié)果更可靠，并簡(jiǎn)化qPCR引物設(shè)計(jì)，無需設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子的引物。該試劑盒包含單組分逆轉(zhuǎn)錄引物 Oligo (dT)20 VN 和隨機(jī)六聚體。用戶可以根據(jù)需要靈活選擇反轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。該試劑盒可以合成全長(zhǎng)cDNA（長(zhǎng)達(dá)20 kb）用于克隆等下游實(shí)驗(yàn)，還可以合成高度均一的cDNA用于qPCR定量。

具有g(shù)DNA消除功能的5G一鏈cDNA合成試劑盒特點(diǎn)：

具有 gDNA 消除功能的 5G First Strand cDNA Synthesis Kit的特點(diǎn)：
* 更高的逆轉(zhuǎn)錄效率和 RNA 轉(zhuǎn)錄本所有區(qū)域的 cDNA 產(chǎn)量更高：基于更高效的 5G 逆轉(zhuǎn)錄酶。
* 引物靈活選擇：針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，可以靈活使用不同類型的反轉(zhuǎn)錄引物。
* 通過5×gDNA Removing Buffer快速去除基因組污染：確保后續(xù)結(jié)果更可靠，并簡(jiǎn)化qPCR引物設(shè)計(jì)，無需跨內(nèi)含子設(shè)計(jì)引物。

成分
gDNA 去除緩沖液 (5X)：用于有效消除 RNA 樣品中基因組 DNA 污染的緩沖液
RT 緩沖液 (10X)：針對(duì)反轉(zhuǎn)錄優(yōu)化的緩沖液；含有 MgCl2、dNTP 和穩(wěn)定劑
5G 酶混合物：逆轉(zhuǎn)錄酶和 RNase 抑制劑的混合物。
Oligo (dT)20 VN 底漆。
隨機(jī)六聚體。
無 RNase H2O：超純品質(zhì)。

儲(chǔ)存試劑盒在冷凍恒溫冰箱中儲(chǔ)存可穩(wěn)定一年。解凍后，使用前將各成分充分混合。不建議頻繁冷凍和解凍。

SD37-4G：具有 gDNA 消除功能的 4G First Strand cDNA Synthesis Kit
具有g(shù)DNA消除功能的4G第一鏈cDNA合成試劑盒包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶4G Reverse Transcriptase，適合逆轉(zhuǎn)錄優(yōu)化。 4G逆轉(zhuǎn)錄酶是在M-MLV（RNase H-）逆轉(zhuǎn)錄酶的基礎(chǔ)上，通過體外分子進(jìn)化技術(shù)獲得的新型逆轉(zhuǎn)錄酶。與上一代逆轉(zhuǎn)錄酶相比，4G逆轉(zhuǎn)錄酶的熱穩(wěn)定性進(jìn)一步大幅提升，非常適合二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。 4G逆轉(zhuǎn)錄酶具有多個(gè)點(diǎn)突變，進(jìn)一步增強(qiáng)模板親和力和進(jìn)展，對(duì)常見逆轉(zhuǎn)錄抑制劑具有更高的耐受性，從而大大提高了合成全長(zhǎng)cDNA的能力。
具有g(shù)DNA消除功能的4G第一鏈cDNA合成試劑盒包含合成所需的所有成分。產(chǎn)品適用于后續(xù)PCR、qPCR等實(shí)驗(yàn)。 2 × RT Mix 包含優(yōu)化的緩沖系統(tǒng)和 dNTP； 4G 酶混合物含有 4G 逆轉(zhuǎn)錄酶和 RNase 抑制劑。試劑盒中包含的Oligo (dT)23 VN對(duì)Poly A+ mRNA的錨定能力比Oligo (dT)18更強(qiáng)，使得逆轉(zhuǎn)錄效率更高。用戶可以根據(jù)需要選擇Oligo (dT)23 VN、隨機(jī)六聚體或基因特異性引物作為反轉(zhuǎn)錄引物。后續(xù)靈活可選的操作步驟不僅可以合成全長(zhǎng)cDNA（長(zhǎng)達(dá)20kb）進(jìn)行克隆，還可以高效合成 cDNA，qPCR 每個(gè)位置的逆轉(zhuǎn)錄效率均一致。

具有g(shù)DNA消除功能的4G一鏈cDNA合成試劑盒特點(diǎn)：
* 基于高效4G反轉(zhuǎn)錄酶，耐溫性保證了RNA復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)可以在高溫條件下打開，獲得更長(zhǎng)的cDNA。
* 模板起始量范圍廣泛：從 1 pg - 5 μg 總 RNA。
* 長(zhǎng)片段擴(kuò)增：長(zhǎng)達(dá)15 kb或以上。
* Anchored Oligo (dT)23 VN 引物專為高特異性結(jié)合位點(diǎn)錨定而設(shè)計(jì)，確保第一鏈 cDNA 合成的效率和成功率。
* 針對(duì)不同的下游應(yīng)用選擇不同的底漆。合成的單鏈cDNA廣泛應(yīng)用于分子克隆、雜交、PCR擴(kuò)增和qPCR反應(yīng)等。

成分：
gDNA 去除緩沖液 (5X)：用于有效消除 RNA 樣品中基因組 DNA 污染的緩沖液
RT 緩沖液 (2X)：針對(duì)反轉(zhuǎn)錄優(yōu)化的緩沖液；含有 MgCl2、dNTP 和穩(wěn)定劑
4G 酶混合物：逆轉(zhuǎn)錄酶和 RNase 抑制劑的混合物。
Oligo (dT)20 VN 底漆。
隨機(jī)六聚體。
無 RNase H2O：超純品質(zhì)。

反轉(zhuǎn)錄指南：
* 高質(zhì)量 RNA 對(duì)于高質(zhì)量 cDNA 合成至關(guān)重要。
* 所有反應(yīng)均在冰上進(jìn)行，以盡量減少 RNA 降解的風(fēng)險(xiǎn)。
* 逆轉(zhuǎn)錄后，必須在 95°C 下孵育 3 分鐘來滅活反應(yīng)。
* 該套件中提供底漆。如果應(yīng)使用基因特異性引物（未提供），我們建議使用終濃度 0.7 uM，并且可以進(jìn)行 0.5 uM 至 1 uM 的引物滴定。
* 對(duì)于兩步 RT-qPCR，添加的 cDNA 體積（來自未稀釋的 RT 反應(yīng)）不應(yīng)超過最終 PCR 體積的 1/10。

質(zhì)量控制： First Strand cDNA Synthesis Kit成分不含污染的 DNase 和 RNase。該試劑盒使用實(shí)時(shí) RT-PCR 和 SYBR Green qPCR Master Mix 進(jìn)行功能測(cè)試，用于擴(kuò)增源自人類通用 RNA 的 GAPDH cDNA。

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